Porcine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus (SADS-CoV) on äskettäin löydetty sian suolistoperäinen patogeeninen koronavirus, joka voi aiheuttaa vetistä ripulia vastasyntyneille porsaille ja aiheuttaa merkittäviä taloudellisia tappioita sikateollisuudelle.Tällä hetkellä ei ole olemassa sopivaa serologista menetelmää SADS-CoV-infektion ja rokotteen tehokkuuden arvioimiseksi, joten on kiireellinen tarve käyttää tehokasta entsyymikytkentäistä immunosorbenttimääritystä (ELISA) tämän puutteen korjaamiseksi.Tässä rekombinanttiplasmidi, joka ekspressoi SADS-CoV-piikki (S) -proteiinia, joka oli fuusioitu ihmisen IgG:n Fc-domeeniin, konstruoitiin rekombinanttibaculoviruksen tuottamiseksi ja ekspressoitiin HEK 293F -soluissa.S-Fc-proteiini puhdistetaan proteiini G -hartsilla ja säilyttää reaktiivisuuden anti-ihmis-Fc- ja anti-SADS-CoV-vasta-aineiden kanssa.Sitten S-Fc-proteiinia käytettiin epäsuoran ELISA:n (S-iELISA) kehittämiseen ja S-iELISAn reaktio-olosuhteiden optimointiin.Tuloksena, analysoimalla 40 SADS-CoV-negatiivisen seerumin OD450nm-arvo, joka vahvistettiin immunofluoresenssimäärityksellä (IFA) ja Western blottauksella, raja-arvoksi määritettiin 0,3711.Kuuden SADS-CoV-positiivisen seerumin variaatiokerroin (CV) S-iELISA-ajojen sisällä ja välillä oli kaikki alle 10 %.Ristireaktiivisuustesti osoitti, että S-iELISAlla ei ole ristireaktiivisuutta muiden sian virusseerumien kanssa.Lisäksi 111 kliinisen seeruminäytteen havaitsemisen perusteella IFA:n ja S-iELISA:n yhteensopivuusprosentti oli 97,3 %.Viruksen neutralointitesti 7 eri seerumin OD450nm-arvolla osoitti, että S-iELISA:lla havaittu OD450nm-arvo korreloi positiivisesti viruksen neutralointitestin kanssa.Lopuksi suoritettiin S-iELISA 300 sikatilan seeruminäytteelle.Muiden sian enterovirusten kaupalliset pakkaukset osoittivat, että SADS-CoV:n, TGEV:n, PDCoV:n ja PEDV:n IgG-positiiviset määrät olivat 81,7 %, 54 % ja 65,3 %., 6 %, vastaavasti.Tulokset osoittavat, että S-iELISA on spesifinen, herkkä ja toistettava, ja sitä voidaan käyttää SADS-CoV-infektion havaitsemiseen sikateollisuudessa.Tämä artikkeli on suojattu tekijänoikeuksilla.kaikki oikeudet pidätetään.
Postitusaika: 22.6.2021